7.3. Listeria Besiyerleri
7.3.1. FRASER Listeria Selective Enrichment Broth (Merck)
Listeria ‘nın 2 aşamalı selektif zenginleştirmesi için kullanılan bu besiyerinde Listeria, yüksek besin içeriği ve geniş tampon kapasitesi ile iyi bir gelişme gösterirken refakatçi flora lithium chloride, nalidixic acid ve acriflavine hydrochloride ile inhibe edilir. Listeria ‘nın ß-D-glucosidase aktivitesi esculin ve ammonium iron (III) citrate ile belirlenir. Glucoside esculin, ß-D-glucosidase ile esculetin ve glukoza parçalanır, esculetin ise demir (III) iyonları ile zeytin yeşili-siyah bir renk veren bileşik yapar. Dolayısı ile bu besiyerinde Listeria varlığına bağlı olarak bir renk kararması olur.
2 aşamalı selektif zenginleştirmenin birinci adımında yarı konsantrasyonda hazırlanmış FRASER Broth, materyal ile inoküle edilir ve 30oC’da 18-24 saat inkübe edilir. 2. adımda ise 1. adım kültüründen 0,1 mL alınarak 10 mL FRASER Broth besiyerine aşılanır, 37oC’da 24 saat inkübe edilir. İnkübasyonun 18. ve 24. saatlerinde Listeria için geliştirilmiş selektif katı besiyerlerine sürme yapılır.
7.3.2. L-PALCAM Broth (Merck)
İstenmeyen mikroorganizmaların gelişimi polymyxin-B-sulfate, acriflavine, lithium chloride ve ceftazidime ile inhibe edilir. Soya lesitini, yumurta sarısı emilsiyonu yerine kullanılır. Esculin, ammonium iron (III) citrate, mannitol ve phenol red Listeria ‘nın ayrımında kullanılır. 30oC’da 24-48 saat inkübasyondan sonra besiyeri renginde kararma olursa, buradan Listeria için selektif bir katı besiyerine sürme yapılır ve inkübasyondan sonra koloni izole edilebilir.
7.3.3. PALCAM Agar (Merck)
Dışkı, biyolojik örnekler, gıdalar ve yoğun kontamine olmuş çevre örneklerinde Listeria ‘nın doğrudan geliştirilmesi ve dolayısıyla sayımı için geliştirilmiş bir besiyeridir. İstenmeyen mikroorganizmaların inhibisyonu polymixin, acriflavine, ceftacidim ve lithium chloride ile sağlanırken Listeria kolonileri zeytin yeşili-siyah renk ile ayrılır. İnhibe olmayan mannitol pozitif enterokok ve stafilokoklar sarı zonlu sarı koloni yaparlar.
7.4. Cl. perfringens için TCS Agar (Merck)
Yüksek besin içeriği Clostridium ‘lar için uygundur. H2S oluşumuna bağlı olarak Clostridium perfringens kolonileri siyah renk alır. Cycloserine, refakatçi floranın inhibisyonunu ve zayıf kolonizasyonunu sağlar. Bu besiyeri için hazırlanan özel katkı 4-Methylumbelliferyl-phosphate (MUP) alkali ve asit fosfotaz için fluorejenik bir substrattır. Asit fosfotaz Cl. perfringens için yüksek spesifiklik gösteren bir indikatördür.
Asit fosfotaz MUP ‘u uzun dalga boylu UV ışığı altında fluoresans veren 4-methylumbelliferone ‘a parçalar. İnkübasyon sonucunda oluşan siyah renkli ve fluoresans veren koloniler Cl. perfringens kolonileridir.
belgesi-795
