Fosfataz Deneyi

 

 

 

 

 Yöntem , sütün iyi bir şekilde pastörize edilip edilmediğini veya pastörüze süte çiğ süt katılıp katılmadığının kontrolu amaçlıdır.

 

Aynı numuneden alınan farklı örneklere, farklı sıcaklıkta lactognost tabletleri veya buffer eriyiği katılarak belirli sıcaklıklarda inkübasyon sağlandıktan sonra meydana gelecek renk değişimi incelenir.

 

 

 

Buffer Eriyiği: 3.5 g saf Na₂CO₃ ile 1.5 g NaHCO₃ bir miktar saf su içerisinde çözülerek son hacim 1 L’ye tamamlanır.

 

Buffer substrat eriyiği: 0.15 g disodyum p-nitrofenilfosfat tarılarak son hacim 100 mL olacak şekilde buffer eriyiği içerisinde çözdürülür.

 

 

 

 Bir tüpün içerisine 5 mL buffer substrat çözeltisi koyulur. Üzerine 1 mL süt örneği ilave edilerek karıştırılır. 37-38ºC’lik su banyosuna yerleştirilir. 2 saat boyunca karıştırılarak bekletirlir. Bu süre sonunda fosfataz enzimi varsa sarı renkli olan p-nitrofenol serbest hale geçerek açığa çıkar.

 

 

 

 

İki farklı tüpe( A ve B tüpleri) 1’er mL’lik süt örneğinden koyulur. B tüpü 80ºC’ye kadar ısıtılır. A tüpüne 1 adet, B tüpüne ise 2 adet lactognost tableti koyularak karıştırılır. 37 ºC’de 1 saat inkübe edilir. A ve B tüplerine 3‘ er tane daha lactognost tableti ilave edilir ve karıştırılır.

 

Eğer sütte fosfataz enzimi varsa A tüpü 2-3 dakika içerisinde koyu mavi renge dönüşecektir. B tüpü ise sürekli gri renkli kalmalıdır.

 

Fosfataz enziminin bulunması demek sütün yeterince pastörize edilmediğini veya pastörize süte çiğ süt katıldığını gösterir.